سعیدی نیا علی رضا، زین الدینی مهدی، سلیمانی مسعود، مجید صادقی زاده . حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 بمنظور تولید سویه ضعیف شده. نشریه طب انتظامی. 1392; 2 (2)
URL: http://jpmed.ir/article-1-134-fa.html
1- ، sadeghma@modares.ac.ir
چکیده: (9466 مشاهده)
مقدمه: هدف از این مطالعه، انجام حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 به منظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز(per) ، یکی از ژنهای درگیر در تشکیل ساختار زنجیره O از LPS دیواره باکتری، از طریق انجام نوترکیبی همساخت حذف گردد.
مواد و روشها: نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی کانامایسین (kanR) بهمراه ترادفهای بالادست و پایین دست ژن per در طرفین آن بود، صورت گرفت. کاست حذف با انجام واکنشهای PCR سه مرحلهای با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ساخته شده و به منظور ساخت وکتور خودکشی، درون وکتور pBluescriptIISK(-) کلون گردید. انتقال وکتور خودکشی بدرون باکتری با روش الکتروپوریشن صورت گرفت.
یافتهها: نتایج حاصل، صحت ساخت کاست حذف و وکتور خودکشی را تأیید کرد. به دنبال انتخاب سویه جهش یافته، حذف ژن per با انجام واکنشهای PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و تعیین توالی قطعه تکثیر یافته، مورد تأیید قرار گرفت. همچنین با مقایسه محصول واکنشهای RT-PCR انجام یافته با پرایمرهای اختصاصی از سویههای والد و جهش یافته، عدم بیان آنزیم پروزامین سنتتاز مورد تأیید قرار گرفت.
بحث و نتیجهگیری: سویه حاصل یک سویه جهش یافته دارای نقص در ساختار LPS خود بوده که علاوه بر کاهش خطا در تمایز ما بین حیوان واکسینه شده و حیوان آلوده در تستهای تشخیصی، میتواند با انجام تستهای ایمنولوژیکی بعنوان یک سویه کاندید واکسن مورد بررسی قرار بگیرد.
نوع مقاله:
مروری سيستماتيک |
موضوع مقاله:
فناوریهای مرتبط با طب انتظامی دریافت: 1392/4/23 | پذیرش: 1393/1/28 | انتشار: 1393/1/28