fa تولید و تخلیص آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه تتانوتوکسین فناوری‌های مرتبط با طب انتظامی Police Medicine Related Technologies پژوهشی اصيل Original Research <p dir="rtl" style="text-align:justify">مقدمه: کزاز نوعی بیماری دستگاه اعصاب است که با افزایش صلابت و گرفتگی‌های عضلات مشخص می‌شود. عامل این بیماری کشنده، توکسین کلستریدیوم تتانی می‌باشد. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره <span dir="ltr">L</span>،‌ <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_N</span> و <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_C</span> می‌باشد. زنجیره <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_C</span> بخش اتصال‌دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندید واکسن مطرح می‌باشد. هدف از این مطالعه استفاده از ژن صناعی زنجیره <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_C</span> تتانواسپاسمین و بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و نهایتاً تهیه سرم و آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن می‌باشد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">مواد و روش‌ها: از میزبان<span dir="ltr">E.</span><span dir="ltr"> c</span><span dir="ltr">oli Bl۲۱ DE۳ </span>، دارای وکتور <span dir="ltr">pET۲۸a</span> حامل ژن نوترکیب زنجیره <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_C</span> تتانوتوکسین، جهت بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب مورد مطالعه استفاده شد. ایمنی‌زایی آن در حیوان آزمایشگاهی صورت گرفت. ضمن بررسی تیتر آنتی‌بادی، آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه تتانوتوکسین از سرم تخلیص گردید.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">یافته‌ها: پس از بهینه‌سازی بیان و تخلیص، پروتئین نوترکیب بیانی حاصل با وسترن‌بلاتینگ تأیید گردید. ایمنی‌زایی در مدل موش نشان از تیتر بالای آنتی‌بادی علیه پروتئین نوترکیب داشت. تخلیص آنتی‌بادی پلی‌کلونال از سرم حیوانات ایمن به روش ستون <span dir="ltr">G</span> انجام گردید.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">نتیجه‌گیری: تولید پروتئین نوترکیب بخش <span dir="ltr">H</span><span dir="ltr">_C</span> و بررسی ایمنی‌زایی آن، نشان‌دهنده تیتر بالایی از آنتی‌بادی پلی‌کلونال در سرم حیوان علیه تتانوتوکسین می‌باشد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">&nbsp;</p> <p>Background: Tetanus is a kind of neurological disease characterized by rigidity and spasm of muscles. The causative agent of this fatal disease is known as Tetanus Toxin, Clostridium tetani. The Tetanospasmin consists of three chains: H_N, H_C and L. The H_C chain is binds domain and immunogenic part of toxin, so it is proposed as a vaccine candidate. In this study, the recombinant H_C protein obtained from synthetic H_C gene was investigated for its immunogenicity. Additionally, antiserum and polyclonal antibody was prepared against this agent.</p> <p>Materials and Methods: Recombinant His-tagged Hc protein was expressed in Escherichia coli Bl21 DE3 and purified with Ni-NTA column. Then, rHc protein was used for animal immunization. Along with survey of antibody titer, serum polyclonal antibody was purified by G column.</p> <p>Results: After gene optimization, expression and purification, rH_C protein was confirmed by western blot technique. Immunization of mice showed high titer of antibody against recombinant protein. Antibody purification from immunized animal serum was carried out as well.</p> <p>Conclusion: The recombinant H_C protein production and its immunogenicity investigation showed high titer of antibody against Tetanospasmin.</p> <p>&nbsp;</p> کزاز, تتانواسپاسمین, زنجیره HC, واکسن نوترکیب tetanus, Hc chain, recombinant protein, polyclonal antibody 101 106 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-77-1&slc_lang=fa&sid=1 Shahram Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 10031947532846009345 10031947532846009345 Yes Assistant Professor, Biology Research Centre, Imam Hossein University, Tehran, Iran استادیار، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران. Golamreza Olad غلامرضا اولاد 10031947532846009346 10031947532846009346 No PhD, Molecular Biotechnology, Applied Biotechnology Research Centre, Baqitatolah University, Tehran, Iran. دکتری، بیوتکنولوژی مولکولی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران. Mohhamad Ali Arefpour محمدعلی عارف پور 10031947532846009347 10031947532846009347 No MSc, Cell and Molecular Biology, Biology Research Centre, Imam Hossein University, Tehran, Iran. کارشناسی ارشد، بیولوژی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران. Jafar Salimian جعفر سلیمیان 10031947532846009348 10031947532846009348 No PhD, Immunology, Chemical Injuries Research Center, Baqitatolah University, Tehran, Iran. دکتری، ایمنی شناسی، مرکز تحقیقات آسیب‌های شیمیایی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران. Mohhamd Javad Bagheripour محمد جواد باقری پور 10031947532846009349 10031947532846009349 No PhD Student, Nanobiotechnology, Biology Research Centre, Imam Hossein University, Tehran, Iran. دانشجوی دکتری، نانوبیوتکنولوژی، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران. Mohhamd Ebrahim Minaie محمد ابراهیم مینایی 10031947532846009350 10031947532846009350 No PhD Student, Nanobiotechnology, Biology Research Centre, Imam Hossein University, Tehran, Iran. دانشجوی دکتری، نانوبیوتکنولوژی، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران. Ehsan Rezaie احسان رضایی 10031947532846009351 10031947532846009351 No MSc, Cell and Molecular Biology, Applied Biotechnology Research Centre, Baqitatolah University, Tehran, Iran. کارشناسی ارشد، بیولوژی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران.