fa کلونینگ اپران پلی‌هیدروکسی بوتیرات و ژن E باکتریوفاژ در پلاسمیدهای جداگانه و بررسی عملکرد ژن E در تسهیل تولید پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اشریشیا کولی فناوری‌های مرتبط با طب انتظامی Police Medicine Related Technologies توصيفی و ارزيابی Descriptive & Survey <p dir="rtl" style="text-align:justify">مقدمه: بیوپلاستیک پلی‌هیدروکسی بوتیرات کاربرد گسترده در صنایع مختلف و ساخت تجهیزات پزشکی دارد. هزینه‌های استخراج و تخلیص پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اشریشیا کولی، بخش اعظم هزینه‌های تولید را به خود اختصاص داده است. ژن <span dir="ltr">E</span> باکتریوفاژ <span dir="ltr">Ф</span><span dir="ltr">x174</span> با ایجاد تونل غشایی برای لیز باکتری میزبان استفاده می‌شود. هدف از انجام این مطالعه، بررسی عملکرد ژن <span dir="ltr">E</span> در ایجاد تونل غشایی و رهاسازی پلی هیدروکسی بوتیرات تولیدشده در اشریشیا کولی می‌باشد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">مواد و روش‌ها: در این مطالعه، اپران پلی هیدروکسی بوتیرات بعد تکثیر اولیه با واکنش زنجیره پلی‌مراز توسط پلاسمید <span dir="ltr">pUC18</span> کلون و تحت کنترل پروموتور اپران بیان شد. ژن <span dir="ltr">E</span> نیز پس از تکثیر با واکنش زنجیره پلی‌مراز توسط پلاسمید <span dir="ltr">pMR103</span> کلون و تحت کنترل پروموتور <span dir="ltr">T7</span> بیان گردید. برای بررسی تشکیل تونل غشایی در باکتری میزبان از میکروسکوپ الکترونی استفاده شد. ارزیابی پلی‌هیدروکسی بوتیرات تولیدی با کروماتوگرافی گازی و رنگ‌آمیزی سودان سیاه انجام شد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">یافته‌ها: با فعال شدن ژن <span dir="ltr">E</span> و لیز باکتری، جذب نوری نمونه کاهش یافت. در بررسی بقایای باکتریایی به‌دست‌آمده از محیط کشت باکتری نوترکیب با میکروسکوپ الکترونی، منافذ غشایی در باکتری‌های لیز شده دیده شد. نتایج رنگ‌آمیزی سودان سیاه و کروماتوگرافی گازی نشان داد که گرانول‌های پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اثر ایجاد تونل‌های غشایی در محیط کشت آزاد شده است.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">نتیجه‌گیری: ژن لیز <span dir="ltr">E</span> می‌تواند برای کاهش هزینه و تسهیل استحصال پلی‌هیدروکسی بوتیرات در باکتری دراشریشیا کولی به‌کار رود که می‌تواند در ساخت تجهیزات یکبار مصرف پزشکی و اتاق عمل مورد استفاده قرار گیرد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">&nbsp;</p> <p>Background: Polyhydroxybutyrate is a biodegradable plastic that has widespread application in various industries and in the field of medical equipment production. In E.coli, the most cost of Polyhydroxybutyrate production (PHB) is related to its extraction and purification processes. E gene of Phage Фx174 with conformation of membrane tunnel is used for lysing the hosted bacteria. This study was conducted to investigate the function of E gene in conformation of membrane tunnel and release of produced PHB in E.coli. Materials and Methods: In this study, after amplification with polymerase chain reaction (PCR), PHB operon was cloned by pUC18 while its expression controlled by operon promoter. E gene was amplified with PCR and cloned by pMR103 plasmid while it&rsquo;s expression controlled by T7 promoter. Lysis process and conformation of membrane tunnel were evaluated by electronic microscope. Analysis of produced PHB was performed by gas chromatography and Sudan staining. Results: With activation of E gene and lysis of bacteria, optical density of specimen decreased. In the analysis of bacterial debris which achieved from E.coli medium&nbsp;by electronic microscope, we observed membrane pores in lysed bacteria. The results of gas chromatography and Sudan staining showed that PHB granules have been released to medium&nbsp;by conformation of membrane tunnel. Conclusion: Lysis&nbsp;E gene can be used for decreasing the cost and facilitating the extraction of PHB in E.coli that can be applied for manufacture of disposable medical and operating room equipment.</p> بیوپلاستیک, پلی‌هیدروکسی بوتیرات, ژن E, باکتری E.coli bioplastic, polyhydroxybutyrate, E gene, E. coli 175 182 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-326-1&slc_lang=fa&sid=1 Hadi Shirzad هادی شیرزاد Hadi_shirzad@yahoo.com 10031947532846009425 10031947532846009425 Yes Assistant Professor, Technology Management Department, Police Sciences and Social Studies Institute, Tehran, Iran. استادیار، گروه مدیریت فن‎آوری، پژوهشگاه علوم انتظامی و مطالعات اجتماعی، تهران، ایران. Majid Saadati مجتبی سعادتی Saadati_m@yahoo.com 10031947532846009426 10031947532846009426 No Professor, Department of Biology, Emam Hossein University, Tehran, Iran. استاد، گروه زیست‌شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران. Mojtaba Saadati وحید خلقی vahidkholghioskooei@gmail.com 10031947532846009427 10031947532846009427 No MSc, Research and Studies Organization of Police, Tehran, Iran. کارشناسی ارشد، سازمان تحقیقات و مطالعات ناجا، تهران، ایران.