fa بررسی اثر یک مشتق از پروتئین Apaf-1 بر فعالیت کاسپاز سلول‎های HEK293T پژوهشی اصيل Original Research <p>مقدمه: مرگ برنامه‌ریزی شده سلول یا همان آپوپتوز یکی از مهمترین فرآیندهای فیزیولوژیکی در تکوین و حفظ هموستازی موجودات چندسلولی می‌باشد. هر گونه اختلالی در تنظیم آپوپتوز منجر به ایجاد اختلالات گسترده ژنتیکی، بیماریهای خود ایمنی و سرطان می‌شود. فرآیند آپوپتوز هم در بحث سلامت و هم در بیماریها ضروری می‌باشد. اصطلاح آپوپتوز به تغییرات مورفولوژیکی یک سلول که درگیر مرگ برنامه‌ریزی شده باشد اطلاق می‌گردد که این تغییرات معمولاً به صورت چروکیدگی سلول، متراکم شدن هسته، برآمدگی‌های سطح غشاء، قطعه قطعه شدن غشاء پلاسمائی و تبدیل شدن آنها به اجسامی به نام اجسام آپوپتوزی و تغییرات سطح غشاء که در نهایت به فاگوسیتوز شدن سلول آپوپتوزی منجر می‌شود. مواد و روشها: پس از ایجاد جهش هدف دار در ژنApaf-1 به کمکPCR ، سلول&lrm;های HEK293T به کمک لیپوفکتامین ترانسفکت شدند. 24 ساعت بعد از ترانسفکشن سلولها در حضور دوکسوروبیسین قرار گرفتند و فعالیت کاسپاز 3 و 7 آنها در زمانهای مختلف مورد سنجش قرار گرفت. یافتهها: فعالیت کاسپاز 3 و 7 به خوبی در سلول&lrm;های ترانسفکت شده مشاهده شد و این فعالیت حدود 3 برابر سلول&lrm;های کنترل بود که این داده به خوبی نشان دهنده افزایش فعالیت کاسپاز 3 و 7 در سلول&lrm;هایHEK293T است. با توجه به مشاهده صورت گرفته احتمالاً دومین انتهایی پروتئین Apaf-1 نقش کنترلی بر روی آزادسازی کاسپاز دارد. نتیجه&lrm;گیری: نتایج این پژوهش نشان داد دومین انتهایی پروتئینApaf-1 فعالیت کاسپازهای سلول را کنترل می&lrm;کند و امکان استفاده از آن به عنوان یک بیوسنسور برای غربالگری داروهای ضد سرطان وجود دارد.</p> <p>Background: Programmed cell death or apoptosis is one of the most important physiological processes involved in development and homeostasis maintenance of multicellular organisms. Every defect in apoptosis regulation leads to wide variety of genetic disorders, autoimmune diseases and cancers. Apoptosis is an essential process in both health and diseases. Apoptosis is defined as morphological changes in a cell undergoing programmed cell death. These changes lead to cell shrinkage, nuclear condensation, membrane intrusion, plasma membrane fractionation and their conversion to apoptotic bodies and changes in cell surface membrane which cause phagocytosis of the cell bearing apoptosis. Materials and Methods: Apaf-1 gene is mutated using PCR and then transfected into HEK293T cells by lipofectamin. 24 h transfected cells exposed to doxorubicin and caspase 3/7 activity was measured over different times. Result: Caspase 3/7 activity was observed obviousely in transfected cells, which was 3 fold greater than those of controls. This data demonstrates the increase in caspase 3/7 activity in HEK293T cells. Based on our observation, the terminus domain in Apaf-1 is probably play a role in releasing the caspases. Conclusion: The results of this study indicated that terminal domain of Apaf-1 has pivotal role in caspase regulation and it is possible to design a biosensor for screening the anticancer drugs by removing terminal domain of this protein.</p> مرگ برنامه‎ریزی شده, کاسپاز, آپاپتوز, آپاپتوزوم, سرطان programmed cell death, caspase, apoptosis, apoptosom, cancer 51 60 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-305-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Taha Mohammadi Azad محمدطه محمدی آزاد biol.taha@gmail.com 10031947532846009385 10031947532846009385 Yes 1M.Sc Student, Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Amin Tashakor امین تشکر 10031947532846009386 10031947532846009386 No 1M.Sc Student, Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 1M.Sc Student, Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. Roohullah Hemmeti روح الله همتی 10031947532846009387 10031947532846009387 No 2ph.D Student, Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran دانشجوی دکتری، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران. Saman Hosseinkhani سامان حسینخانی 10031947532846009388 10031947532846009388 No Professor, Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. استاد، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.