fa شناسایی سریع باکتری ویبریو کلرا با استفاده از واکنش زنجیره‎ای پلیمراز شش‎گانه (Hexaplex PCR) فناوری‌های مرتبط با طب انتظامی Police Medicine Related Technologies پژوهشی اصيل Original Research <p dir="rtl" style="text-align:justify">مقدمه: ویبریو کلرا (عامل بیماری وبا) یک پاتوژن مهم در بروز بیماری اسهال در بخش‌های گسترده‌ای از آسیا و آفریقا است. این باکتری یک پاتوژن روده‌ای است که می‌تواند سبب بروز بیماری همه‌گیر گردد. درنتیجه تشخیص سریع، حساس و اختصاصی ویبریو کلرا، مورد توجه اکثر آزمایشگاه‌های تشخیصی است. هدف از این پژوهش، طراحی و توسعه یک روش سنجش سریع ژنوم باکتری ویبریو کلرا بر اساس واکنش زنجیره‌ای پلیمراز شش‌گانه (<span dir="ltr">Hexaplex PCR</span>) است.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">مواد و روش‌ها: پرایمر جهت شناسایی شش ژن بیماری&lrm;زا و تنظیمی از باکتری ویبریو کلرا انجام شد. ژن‌های مذکور شامل ژن‌های کلرا توکسین زیر واحدهای <span dir="ltr">A</span> و (<span dir="ltr">ctxA, ctxB</span>) <span dir="ltr">B</span>، توکسین <span dir="ltr">zot</span>، انتروتوکسین کلرا (<span dir="ltr">ace</span>)، توکسین تنظیمی (<span dir="ltr">tcp</span>) و پروتئین غشاء خارجی (<span dir="ltr">ompW</span>) است. ژنوم نمونه استاندارد، با استفاده از پرایمرهای مذکور در واکنش زنجیره‌ای پلیمراز شش‌گانه، مورد مطالعه قرار گرفت. همچنین حساسیت و اختصاصیت سنجش مذکور نیز ارزیابی شد.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">یافته‌ها: انجام <span dir="ltr">PCR</span> شش‌تایی، حضور ژن‌های بیماری‌زا و تنظیمی باکتری ویبریو کلرا را در نمونه استاندارد نشان داد. همچنین نتایج بیانگر اختصاصیت مناسب روش بوده و حساسیت آن تا حدود <span dir="ltr">cfu</span> 100 از باکتری محاسبه گردید.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">نتیجه‌گیری: از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز شش‌گانه می‌توان برای طراحی کیت تشخیصی عامل بیماری وبا استفاده نمود.</p> <p dir="rtl" style="text-align:justify">&nbsp;</p> <p>Background: Vibrio cholerae is an important agent of diarrheal diseases in many parts of Asia and Africa. It is an enteric pathogen which produce a global pandemic of the disease. Rapid, sensitive and specific measurement of V. cholerae is an interest for many clinical laboratories. The aim of this study was to design and develop a hexaplex PCR assay for rapid detection of V. cholerae.</p> <p>Materials and Methods: Six pair of primers were designed for specific amplification of the virulence and regulatory genes for Vibrio cholerae O₁: cholera toxin enzymatic subunit A (ctxA) and B (ctxB), zonula occludens toxin (zot), accessory cholerae enterotoxin (ace), toxin- coregulated pilus (tcp) and outer membrane protein (ompW). Hexaplex PCR carried out using six primers and standard genes. Moreover, sensitivity and specificity of this method were determined.</p> <p>Results: Hexaplex PCR showed the presence of the virulence and regulatory genes for Vibrio cholerae O₁ in the standard sample. In addition, specificity was qualified and sensitivity determined 100 cfu/ml in this method.</p> <p>Conclusion: Hexaplex PCR Assay could be used to design a kit for cholerae detection.</p> <p>&nbsp;</p> ویبریو کلرا, PCR, شناسایی, حساسیت, اختصاصیت vibrio cholerae, PCR, detection, specificity, sensitivity 77 84 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-152-2&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini@yahoo.com 10031947532846009332 10031947532846009332 Yes Assistant Professor, Department of Bioscience and Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, Iran استادیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Ali Reza Saeedinia علی رضا سعیدی نیا 10031947532846009333 10031947532846009333 No PhD Student, Molecular Genetic, Department of Bioscience and Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, Iran دانشجوی دکتری ژنتیک مولکولی، مربی، پژوهشکده علوم فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Vahid Sadeghi وحید صادقی 10031947532846009334 10031947532846009334 No MSc, Biotechnology, Department of Bioscience and Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, Iran کارشناس ارشد بیوتکنولوژی، پژوهشکده علوم فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران