fa حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 بمنظور تولید سویه ضعیف شده فناوری‌های مرتبط با طب انتظامی Police Medicine Related Technologies مروری سيستماتيک Systematic Review مقدمه: هدف از این مطالعه، انجام حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 به منظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز(per) ، یکی از ژن‏های درگیر در تشکیل ساختار زنجیره O از LPS دیواره باکتری، از طریق انجام نوترکیبی همساخت حذف گردد. مواد و روش‏ها: نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مقاومت آنتی‏بیوتیکی کانامایسین (kanR) بهمراه ترادف‏های بالادست و پایین دست ژن per در طرفین آن بود، صورت گرفت. کاست حذف با انجام واکنشهای PCR سه مرحله‏ای با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ساخته شده و به منظور ساخت وکتور خودکشی، درون وکتور pBluescriptIISK(-) کلون گردید. انتقال وکتور خودکشی بدرون باکتری با روش الکتروپوریشن صورت گرفت. یافته‏ها: نتایج حاصل، صحت ساخت کاست حذف و وکتور خودکشی را تأیید کرد. به دنبال انتخاب سویه جهش یافته، حذف ژن per با انجام واکنش‏های PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و تعیین توالی قطعه تکثیر یافته، مورد تأیید قرار گرفت. همچنین با مقایسه محصول واکنشهای RT-PCR انجام یافته با پرایمرهای اختصاصی از سویه‏های والد و جهش یافته، عدم بیان آنزیم پروزامین سنتتاز مورد تأیید قرار گرفت. بحث و نتیجه‏گیری: سویه حاصل یک سویه جهش یافته دارای نقص در ساختار LPS خود بوده که علاوه بر کاهش خطا در تمایز ما بین حیوان واکسینه شده و حیوان آلوده در تست‏های تشخیصی، می‏تواند با انجام تست‏های ایمنولوژیکی بعنوان یک سویه کاندید واکسن مورد بررسی قرار بگیرد. Background: The aim of this study was to employ gene knockout technique in Brucella melitensis Rev1 to attain the attenuated mutant strain. Therefore, we deleted the perosamine synthetase encoding gene (per), one of the LPS O-chain coding genes, by homologous recombination. Materials and Methods: Homologous recombination was performed using a suicide vector containing deletion cassette, which comprised kanamycin resistance sequence (kanR) flanking with the per upstream and downstream sequences. Deletion cassette was constructed by PCR reactions using specific primers, and cloned into pBluescriptIISK(-) to construct suicide vector. The suicide vector was transformed into Brucella by electroporation. Results: The results were confirmed deletion cassette and suicide vector construction. After mutant strain selection, deletion of the per gene was confirmed by PCR using specific primers, and sequencing. Also, loss of the per gene function was confirmed by comparison of RT-PCR products from wild type and mutant strain. Conclusion: The mutant Brucella had deficiency in its LPS O-chain structure, so in addition to reduce error in diagnostic tests to discriminate between vaccinated and infected animal, it can to characterize as a candidate vaccine with later immunological tests. بروسلاملی‏تنسیس Rev1، پروزامین سنتتاز، حذف ژنی، وکتور خودکشی brucella melitensis Rev1, gene deletion, perosamine synthetase, suicide vector 127 136 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-188-1&slc_lang=fa&sid=1 علی رضا سعیدی نیا 10031947532846001426 10031947532846001426 No مهدی زین الدینی 10031947532846001427 10031947532846001427 No مسعود سلیمانی 10031947532846001428 10031947532846001428 No مجید صادقی زاده sadeghma@modares.ac.ir 10031947532846001429 10031947532846001429 Yes