@ARTICLE{Rahmati, author = {Abdollahzadeh Parsa, Mehdi and Hosseinkhani, Saman and jalili, shirin and Rahmati, Fereshteh and }, title = {Expression Optimization, Purification, and Fluorescence Spectroscopic Assessment of Creatinase Enzyme in the Presence of Gold Nanoparticles}, volume = {11}, number = {1}, abstract ={اهداف: امروزه استفاده از روش‌های بر پایه واکنش‌های آنزیمی با هدف پایش سلامت افراد به خصوص در حوزه نیروهای نظامی و انتظامی رواج گسترده‌ای یافته است. یکی از روش‌های آنزیماتیک، استفاده از آنزیم کراتیناز برای سنجش کراتین و کراتینین در مایعات جهت بررسی سلامت کلیه‌ها، عضلات و غده تیروئید است. هدف این تحقیق بهینه‌سازی بیان آنزیم کراتیناز و بررسی اثر نانوذرات طلا بر پایداری آنزیم کراتیناز بود. مواد و روش‌ها: این پژوهش در بهار و تابستان سال 1400 در مؤسسه الکتروشیمی واقع در دانشگاه تهران انجام شد. در این مطالعه ابتدا باکتری E.Coli BL21 حاوی وکتور تکثیری pET28a در محیط TB کشت شد، سپس در دماهای 18، 22، 28، 32 و 37 درجه القا گردید. در ادامه پس از سونیکاسیون، تخلیص آنزیم‌ها با کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. پس از تأیید بیان با SDS-PAGE، غلظت آنزیم‌های بیان‌شده در دماهای القای متفاوت با روش برادفورد اندازه‌گیری و مقایسه شد. در ادامه فعالیت آنزیم‌ها با روش رنگ‌سنجی بررسی و مقایسه گردید. نهایتاً با روش طیف‌سنجی فلورسانس، اثر نانوذرات طلا بر ساختار آنزیم کراتیناز مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: بررسی میزان بیان آنزیم کراتیناز در دماهای مختلف در محیط کشت TB نشان داد که در دمای 28 درجه، بیشترین مقدار آنزیم با بالاترین میزان فعالیت حاصل شد. از طرفی طیف‌سنجی فلورسانس آنزیم کراتیناز در حضور و عدم حضور نانوذرات طلا در طول موج تهییج 295 نانومتر، کاهش شدت فلورسانس در حضور نانوذرات طلا را نشان داد. نتیجه‌گیری: القای بیان در 28 درجه‌ سانتی‌گراد در محیط کشت TB، آنزیمی فعال‌تر و غلیظ‌تر ارائه می‌دهد. همچنین نانوذرات طلا باعث کاهش شدت فلورسانس آنزیم شد که می‌تواند نشانگر تغییر در ریزمحیط آمینواسید فلورسانت در ساختار آنزیم کراتیناز باشد. }, URL = {http://jpmed.ir/article-1-1069-fa.html}, eprint = {http://jpmed.ir/article-1-1069-fa.pdf}, journal = {Journal of Police Medicine}, doi = {10.30505/11.1.18}, year = {2022} }