fa جداسازی و مشخصه یابی وزیکولهای برون سلولی از نمونه خون انسان: یک روش امیدبخش در بیوپسی مایع فناوری‌های مرتبط با طب انتظامی Police Medicine Related Technologies پژوهشی اصيل Original Research <div style="text-align: justify;"><strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">اهداف: </span></span></span></strong><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">وزیکول&shy;های خارج سلولی، تقریباً توسط تمامی سلول&shy;های بدن ترشح می&shy;شوند و حاوی بیومارکرهای ارزشمندی هستند که می&shy;توان از آن در جهت تشخیص زودهنگام انواع بیماری&shy;ها بخصوص در حوزه سرطان بهره برد. نیاز به یک متد تشخیصی سریع و کارآمد با قابلیت کمیت سنجی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> جداسازی شده که در عین حال قابل اجرا در شرایط کمبود تجهیزات آزمایشگاهی و غیرتهاجمی باشد، می&shy;تواند از جمله ضروریات در جهت پیشبرد مطالعات تشخیصی مبتنی بر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> باشد. هدف از تحقیق حاضر ارئه روش نسبتا سریع و کارامد به منظور جداسازی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> از خون به عنوان یک مایع بیولوژیک مهم در انسان است.<strong><span style="color:#0070c0;"></span></strong></span></span><br> <strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">مواد و روش‌ها: </span></span></span></strong><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">در این مطالعه تجربی با تلفیق دو روش کروماتوگرافی مبتنی براندازه و سانتریفیوژ دور بالا،&nbsp; </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">در طی یک ساعت با موفقیت از پلاسما انسان جداسازی شدند. جهت تائید فرایند جداسازی مطابق با معیارهای مایسیو، سه پروتئین غشایی تتراسپینن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CD63</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CD81</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">،</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CD9</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp; و یک پروتئین لومنال </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">TG101</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> به عنوان شاخص&not;های پروتئینی مثبت و پروتئین کانکسین به عنوان مارکر منفی به کمک وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفتند.</span></span><br> <strong><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته‌ها: </span></span></span></strong><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">حضور حداکثری مارکرهای مثبت و عدم حضور مارکر منفی در فرکشن</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">های 7 الی 9 تائید شد. علاوه بر این، توزیع اندازه آنها به کمک تکنیک </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">DLS</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> با میانگین قطر در محدوده ۱۰۰ نانومتر صورت گرفت. کمیت‌سنجی مقدار محتوای پروتئینی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> نیز با سنجش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">BCA</span></span><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام شد.</span></span><br> <strong><span dir="RTL"><span style="color:#0070c0;"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه‌گیری: </span></span></span></span></strong><span dir="RTL"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;">تحقیق حاضر مبین آن است که تلفیق روش‌های سانتریفیوژ دور بالا و کروماتوگرافی مبتنی بر اندازه به منظور جداسازی </span></span></span><span style="font-family:Cambria,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">EVs</span></span><span dir="RTL"><span style="font-family:IRANSharp_PrintingSize,sans-serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> از پلاسمای خون افراد بسیار کارامد است.</span></span></span> <span dir="LTR"></span><span dir="LTR"></span></div> <strong>Aims: </strong>Extracellular vesicles (EV) are nanoscale vesicles that were previously thought to be secreted into the bloodstream by apoptotic cells. Today, EVs have been demonstrated to be secreted by almost all cells in the body, which contain valuable biomarkers for early diagnosis of a wide variety of diseases, particularly cancers. Efficient separation of EVs encounter challenges due to the presence of proteins and lipoproteins. Hence, the need for a time-saving and non-invasive diagnostic method with the ability to quantify isolated EVs, which is also applicable to resource-limited situations, can be the major necessities to advance EV-based diagnostic studies. The aim of the present study was to provide a relatively rapid and efficient method for isolating EV from blood as an important biological fluid in humans.<br> <strong>Materials & Methods: </strong>In this case study, with the combination of size exclusion chromatography and ultracentrifuge, EVs were successfully isolated from human blood plasma samples within an hour. To confirm the isolation process according to MISEV guidelines, three tetraspanin membrane proteins CD63, CD81, CD9, and one luminal protein TG101, were evaluated as positive protein markers and connexin protein as a negative marker by Western blot.<br> <strong>Findings: </strong>The maximum presence of positive markers and the absence of negative markers in F7 to F9 fractions were confirmed. Additionally, their size distribution evaluation was done using the DLS technique with an average diameter in the range of 100 nm. Quantification of the protein content of EVs was also performed by BCA assay.<br> <strong>Conclusion: </strong>The present study shows that the combination of high-speed centrifugation and size-based chromatography methods is very effective in isolating EV from the blood plasma of individuals<span dir="RTL"></span> وزیکولهای خارج سلولی, جداسازی, نشانگر, کروماتوگرافی مبتنی براندازه, پراکندگی نور پویا Extracellular vesicles, Isolation, Biomarkers, Size exclusion chromatography, 99 106 http://jpmed.ir/browse.php?a_code=A-10-386-9&slc_lang=fa&sid=1 Faezeh Shekari فائزه شکری Faezehshekari@gmail.com 100319475328460010248 100319475328460010248 No Royan Institute for Stem Cell Biology and Technology, ACECR, Cell Science Research Center, Department of Stem Cells and Developmental Biology, Tehran, Iran. موسسه زیست شناسی و فناوری سلول های بنیادی رویان، ACECR، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلولهای بنیادی و زیست شناسی، تهران، ایران Shirin Jalili شیرین جلیلی jalili.shirin@yahoo.com 100319475328460010249 100319475328460010249 No Research Institute of Police Science and Social Studies, Tehran, Iran. پژوهشگاه علوم انتظامی و مطالعات اجتماعی، تهران، ایران Fereshteh Rahmati فرشته رحمتی noora_1232003@yahoo.com 100319475328460010250 100319475328460010250 Yes Faculty of Biology, Department of Biochemistry. Islamic Azad University, Tehran, Iran دانشکده زیست شناسی، دپارتمان بیوشیمی، واحد تهران شمال، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران